长叶红砂V-H~+-ATPase B subunit基因及NHX基因的初步表达分析

【摘要】长叶红砂(Reaumuriatrigyna)为我国内蒙古东阿拉善-西鄂尔多斯所特有,具有极强耐盐耐旱性,具有独特的盐腺,可外排盐离子。通过长叶红砂转录组测序发现大量与离子转运相关的基因在盐胁迫下表达上调,如HKT、SOS、NHX、KUP、AKT和HAK等；Na+/H+逆向转运蛋白是位于液泡膜上的离子反向运输体,可将Na+区隔化至液泡内,防止细胞质中高Na+盐毒害,维持细胞离子平衡和渗透平衡以提高植物盐耐受性；离子转运等一系列生理活动所消耗的能量大部分由ATP酶水解提供,所以V-H+-ATPase对于植物耐盐性也是至关重要的。而其中B亚基不仅包含调节位点,而且参与催化位点的形成,在该酶中起重要的作用。从强旱生泌盐植物长叶红砂中克隆NHX和V-H+-ATPaseBsubunit基因并验证其在非生物胁迫下的功能,将为揭示该植物离子转运与其强抗逆性关系奠定基础。主要结果如下：1.对已有的NHX和V-H+-ATPaseB全长进行序列分析,NHX全长为2622bp,开放阅读框为1662bp,编码一个553个氨基酸的多肽。蛋白分子量为60.9kDa。V-H+-ATPaseB全长为2061bp,开放阅读框为996bp,编码一个331个氨基酸的多肽。分子量为36.3kDa。2.半定量分析显示,在不同浓度NaCl胁迫下,RtV-ATPaseB基因表达量从0到300mM逐渐升高,在300mM时到达最高,NHX基因表达量在200mM时达到最高,后又逐渐下降,两个基因在400mM时表达量最低。3.构建了V-H+-ATPaseB基因的原核表达载体,并将其导入大肠杆菌中,经SDS-PAGE电泳检测,观察到了预期大小的融合蛋白表达。4.重组菌对NaCl耐受性明显高于空载体菌体,对高浓度山梨醇的耐受性虽然不明显,但对100和200mM浓度的山梨醇耐受性中可以看出重组菌的生长状况更好。5.构建了RtV-ATPaseB基因的真核表达载体,并将其转入拟南芥中,为以后的功能鉴定实验奠定了基础。
【作者】燕霞；
【导师】王迎春；
【作者基本信息】内蒙古大学，生物工程，2014，硕士
【关键词】长叶红砂；NHX；V-H~+-ATPase；原核表达；非生物胁迫；

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